【AD】人β-淀粉样多肽（1-42)注射诱导AD模型

1  实验器材

干棉球、碘伏棉球、75%酒精、生理盐水、注射器（1ml）、黑色记号笔、大鼠脑立体定位仪、微量注射器。手术器械：颅钻、弯镊1对、组织剪、缝合线、缝合针。

 

2  实验试剂

Aβ1-42溶于PBS缓冲液中（10ug/ul）；麻醉剂：2%戊巴比妥钠（50mg/kg）；生理盐水。

 

3  造模步骤

3.1 SD大鼠称重，2%戊巴比妥钠（50mg/kg）腹腔内注射麻醉。麻醉后继而将大鼠头部固定于脑立体定位仪上。

3.2 剪去局部毛发，消毒后沿矢状线切开皮肤，切口长约1.5cm,将骨膜向两侧推开显露头骨。

3.3 按照大鼠脑立体定位图谱，以前囟为零起点，前囟后3.5 mm处为穿刺点，中线右侧旁开2mm，而后颅钻钻开颅骨，采用微量注射器自脑表面垂直进针3mm，即：(AP= -3.5 mm, ML=2.0 mm, DV=3.0 mm)，双侧海马CA1区缓慢匀速注射Aβ1-42各10 μg (1 μL)，留针5 min，使药物充分扩散，缓慢退针5min，无菌骨蜡封闭钻孔，术区滴注庆大霉素，缝合伤口消毒。

3.4术后放回饲养笼，给予充足饲料和水，青霉素涂抹术口以防止感染。

 

4  模型评判标准

行为学检测：进行Morris水迷宫试验，试验分为定位航行实验和空间探索实验。

4.1 定位航行实验：大鼠连续接受5天的训练，每天4次，每次时间间隔30min，记录下大鼠从4个入水点和入水并找到平台所需要的时间，即逃避潜伏期。4次潜伏期的平均成绩作为当日的最终结果进入到最后统计。

4.2 空间探索实验：实验的第6天，撤去平台，从距离平台的最远端入水后，将大鼠放入水中，记录下30s内大鼠的游泳轨迹，并观察分析大鼠穿越原平台所在位置的次数。

 

5  操作注意事项

5.1水迷宫测试，每天在固定的时间测试，操作轻柔，避免不必要的应激刺激。