【MCAO】光化学栓塞法建立缺血性脑卒中模型评价方案

一、动物模型命名

线栓法制备脑卒中（MCAO）大鼠模型

二、模型制备规范（环境、设备、操作程序、实验操作规程）

SD大鼠称重，10%水合氯醛（0.5ml/100g）麻醉。将大鼠用医用胶带固定于操作台上，颈部剃毛。颈部酒精棉球消毒，眼科剪沿锁骨正中做竖向切口，长度约3~4cm左右。分离皮下肌肉组织，可见底部肌肉下方有轻微搏动即为颈总动脉，钝性分离覆盖于颈总动脉上方的肌肉，当分离出颈总动脉后，眼科镊小心分离伴行于颈总动脉的迷走神经，继续小心分离干净动脉周围粘膜组织，分离出的颈总动脉大约1~1.5cm左右即可。小心剔除覆盖于动脉上方的粘膜组织，此时可见颈外动脉、颈内动脉与颈总动脉呈“Y字形”分布，分离出独立的两根动脉（颈外、颈内）。血管分离完毕后，结扎颈总动脉（越靠尾部越好）。再结扎颈外动脉，两个结扎之间备线，打松结。动脉夹暂时夹闭颈内动脉。在备线与颈总动脉结扎处之间，用眼科剪做一“V字形”切口，在离Y字形分叉处约0.8 mm处位于血管的正前部剪一“V”形切口，使血管在自然状态下，用眼科镊夹持栓线，缓慢进入颈内动脉，到达动脉夹时，将预留的线稍微拉紧（防止远心端回流渗血），松开动脉夹，将颈总动脉稍向右拉继续插入栓线，当特制栓线黑色标记处到达Y字形分叉口附近时，此时栓线已进入大脑中动脉且不能继续前行。

三、模型评价方法与指标体系（该模型制备采用的生理、生化和病理方法，包括行为、影像、生理生化和组织切片等技术设备，仪器设备满足模型评价的要求，指标完善，条件稳定。）

行为学评分：大鼠苏醒后，参照Zea Longa 5分制评分标准：0分代表无神经缺损症状；1分代表不能完全伸展对侧前肢；2分代表行走时向偏瘫侧转圈；3分代表行走时向偏瘫侧倾倒；4分代表不能自发行走、意识障碍；5分代表死亡。累积1分及以上即为造模成功；但凡达到5分、解剖发现蛛网膜下腔出血或无神经功能缺损症状（0分）均视为造模失败。

四、模型的安全性评价（监督管理、处置措施、微生物菌株管理、细胞系描述、遗传分析、对环境和生态影响评估等。）

该造模方法未使用化学试剂、药品等，不会对人员、动物、环境造成危害。

五、有助于动物模型鉴定和评价的其它材料（如影响模型制备、实验操作的注意事项，以及对造模的成功率、成活时间、死亡率的影响等。）

1、分离颈部肌肉时，两侧小块肌肉叫鼓泡腺体（很多人误认为是甲状腺），避免损伤导致出血。

2、见到颈动脉鞘了则要注意细致分离迷走神经，若损伤则可能影响其呼吸而死亡的。

3、栓线不能反复进退，否则及容易造成蛛网膜下腔出血，而且很容易误解为模型成功，因为这时的神经功能改变也很明显，但并不是由于栓塞引起的。

4、大鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型，梗死体积出现的最小时间点可能为 2 h，体积随时间进行性增大，至 12h 基本趋于稳定。