【MCAO】线栓法大鼠MCAO模型

2022-06-09 15:52管理员

 

实验器材

干棉球、酒精棉球、75%酒精、生理盐水、注射器(1ml)、黑色记号笔、固定大鼠用自制拉钩、大鼠板、EP管。手术器械:眼科剪1、弯镊1对、动脉夹2、止血钳2-3、缝合线、缝合针。栓线:采用特制购买栓线

 

实验试剂

TTC染液的配制:TTC用去离子超纯水配成2%TTC溶液(pH7.4),避光保存。麻醉剂:2%戊巴比妥钠

 

造模步骤

3.1 SD大鼠称重,7%水合氯醛(0.5ml/100g)麻醉。将大鼠用医用胶带固定于操作台上,颈部剃毛。

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3.2 颈部酒精棉球消毒,眼科剪沿锁骨正中做竖向切口,长度约3~4cm左右。

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3.3 分离皮下肌肉组织,可见底部肌肉下方有轻微搏动即为颈总动脉,钝性分离覆盖于颈总动脉上方的肌肉,当分离出颈总动脉后,眼科镊小心分离伴行于颈总动脉的迷走神经,继续小心分离干净动脉周围粘膜组织,分离出的颈总动脉大约1~1.5cm左右即可。

3.4 小心剔除覆盖于动脉上方的粘膜组织,此时可见颈外动脉、颈内动脉与颈总动脉呈“Y字形”分布,分离出独立的两根动脉(颈外、颈内)。血管分离完毕后,结扎颈总动脉(越靠尾部越好)

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3.5 再结扎颈外动脉,两个结扎之间备线,打松结。

3.6 动脉夹暂时夹闭颈内动脉。在备线与颈总动脉结扎处之间,用眼科剪做一“V字形”切口,在离Y字形分叉处约0.8 mm处位于血管的正前部剪一“V”形切口,使血管在自然状态下,用眼科镊夹持栓线,缓慢进入颈内动脉,到达动脉夹时,将预留的线稍微拉紧(防止远心端回流渗血),松开动脉夹,将颈总动脉稍向右拉继续插入栓线,当特制栓线黑色标记处到达Y字形分叉口附近时,此时栓线已进入大脑中动脉且不能继续前行。

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3.7 栓线插入完毕后,将预留的结扎线拉紧固定。医用小棉签清理颈部血块,逐层缝合皮肤,酒精棉球消毒,将大鼠放回笼子。1.5 h过后,麻醉大鼠,颈部消毒,打开一个小口,用眼科镊夹住栓线固定处将栓线拔出至其头端,剪去多余栓线,逐层缝合,消毒;假手术组仅剥离颈总动脉后立即缝合创口。术后放回笼子,给予充足饲料和水。

 

模型评判标准

4.1 大鼠苏醒后,参照Zea Longa 5分制评分标准:0分代表无神经缺损症状;1分代表不能完全伸展对侧前肢;2分代表行走时向偏瘫侧转圈;3分代表行走时向偏瘫侧倾倒;4分代表不能自发行走、意识障碍;5分代表死亡。累积1分及以上即为造模成功;但凡达到5分、解剖发现蛛网膜下腔出血或无神经功能缺损症状(0分)均视为造模失败。

 

 

操作注意事项

5.1分离颈部肌肉时,两侧小块肌肉叫鼓泡腺体(很多人误认为是甲状腺),避免损伤导致出血。

5.2见到颈动脉鞘了则要注意细致分离迷走神经,若损伤则可能影响其呼吸而死亡的。

5.3栓线不能反复进退,否则及容易造成蛛网膜下腔出血,而且很容易误解为模型成功,因为这时的神经功能改变也很明显,但并不是由于栓塞引起的。

5.4大鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型,梗死体积出现的最小时间点可能为 2 h,体积随时间进行性增大,至 12h 基本趋于稳定。

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